Y190酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
簡(jiǎn)要描述：
Y190酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞：是GAL4系統(tǒng)酵母雙雜交用實(shí)驗(yàn)菌株，MATa型，能直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒或與MATα型酵母菌株Y187通過(guò)接合（mating）操作進(jìn)行蛋白相互作用驗(yàn)證或篩庫(kù)實(shí)驗(yàn)。轉(zhuǎn)化標(biāo)志為trp1，leu2，cyh2。報(bào)告基因?yàn)閘acZ，HIS3，MEL1。
產(chǎn)品時(shí)間：2024-03-20
打印當(dāng)前頁(yè)Y190 Chemically Competent Cell
酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
溫馨提示
見(jiàn)我司（懋康生物）整理的酵母雙雜交（Yeast two-hybrid assay）產(chǎn)品專題。
產(chǎn)品關(guān)鍵詞：
Y190-GAL4酵母單雜交系統(tǒng)；Y1HGold；pGBKT7；pGADT7；Ar Qual；X-α-Gal；Aureobasidin A （AbA）；金擔(dān)子素；
產(chǎn)品訂購(gòu)：
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
MF2364-1000UL | Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100μl | 290 |
MF2364-5000UL | Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 50×100μl | 1320 |
產(chǎn)品組分：
組分編號(hào) | 組分名稱 | 保存 | 貨號(hào)（規(guī)格） | |
MF2364-1000UL | MF2364-5000UL | |||
MF2364-A | Y190 Chemically Competent Cell | -80℃ | 10×100μl | 50×100μl |
MF2364-B | pGADT7 Control Vector (10ng/μl) | -80℃ | 10μl | 10μl |
MF2364-C | Carrier DNA (10μg/μl) | -20℃ | 100μl | 500μl |
MF2364-D | PEG/LiAC Solution | +4℃ | 5ml | 25ml |
產(chǎn)品描述
Y190是GAL4系統(tǒng)酵母雙雜交用實(shí)驗(yàn)菌株，MATa型，能直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒或與MATα型酵母菌株Y187通過(guò)接合（mating）操作進(jìn)行蛋白相互作用驗(yàn)證或篩庫(kù)實(shí)驗(yàn)。轉(zhuǎn)化標(biāo)志為trp1，leu2，cyh2。報(bào)告基因?yàn)?/span>lacZ，HIS3，MEL1。Y190-GAL4酵母雙雜交系統(tǒng)需要兩種質(zhì)粒配套使用，pGB&pACT2或pGBKT7& pGADT7。pGB由或pGBKT7改造而來(lái)，篩選標(biāo)志為Trp，用于表達(dá)DNA-BD與誘餌蛋白（bait）的融合蛋白；pACT2和pGADT7的結(jié)構(gòu)和功能類似，篩選標(biāo)志為Leu，用于表達(dá)AD與誘捕蛋白（prey）的融合蛋白。
本品為經(jīng)特殊工藝制備的Y190酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞，用pGADT7質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率＞104cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存三個(gè)月。
基因型
MATa, ura3-52, his3-200, ade2-101, lys2-801, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, cyhr2, LYS2 : : GAL1 UAS-HIS3TATA-HIS3, MEL1 URA3 : : GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ
注意事項(xiàng)
- 號(hào)在冰上融化感受態(tài)細(xì)胞。
- 轉(zhuǎn)化高濃度質(zhì)?？上鄳?yīng)減少用于涂板的菌量。同時(shí)轉(zhuǎn)化2-3種質(zhì)?？蛇m當(dāng)增加質(zhì)粒的用量。
- Y190對(duì)高溫敏感，適生長(zhǎng)溫度為27-30℃，一旦高于31℃，生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)化率都呈指數(shù)下降。
- 菌落變粉紅色并不是污染，而是酵母細(xì)胞生長(zhǎng)中的一種常見(jiàn)現(xiàn)象。當(dāng)酵母細(xì)胞在平板上培養(yǎng)幾天，將平板內(nèi)的腺嘌呤消耗殆盡，那時(shí)酵母試圖通過(guò)自身代謝途徑合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破壞，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7，8基因均正常。由此，造成中間產(chǎn)物P-ribosylamino imidazole（AIR）在細(xì)胞的積累使得菌落變?yōu)榉奂t色。
- 酵母菌在缺陷培養(yǎng)基上生長(zhǎng)速度比YPDA培養(yǎng)基慢，營(yíng)養(yǎng)缺陷成分越多，生長(zhǎng)越慢，以轉(zhuǎn)化涂板為例：涂YPDA平板于29℃，48h培養(yǎng)可見(jiàn)直徑1mm克??；涂SD單缺平板于29℃，48-60h培養(yǎng)可見(jiàn)直徑1mm克??；涂SD雙缺平板于29℃，60-80h培養(yǎng)可見(jiàn)直徑1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培養(yǎng)可見(jiàn)直徑1mm克??；
- 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用方法
- Carrier DNA于使用前通過(guò)加熱處理使其變性為單鏈狀態(tài)，方法如下：95-100℃ 水浴或金屬浴3min，快速插入冰中，靜置3min。重復(fù)一次。
- 取100 µl冰上融化的Y190化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞，依次加入預(yù)冷的目的質(zhì)粒0.5-3 µg，單鏈Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 500µl，用槍吹打幾次充分混勻，30℃水浴30 min（在15min時(shí)翻轉(zhuǎn)6-8次混勻）。
- 之后將管子放42℃水浴15 min（在7.5min時(shí)翻轉(zhuǎn)6-8次混勻）。
- 5000 rpm離心40s棄上清，用400 µl ddH2O重懸沉淀，離心30s棄上清。
- 用50 µl ddH2O重懸，涂板，放入29℃培養(yǎng)48-96 h。
— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品與實(shí)驗(yàn)服務(wù)工作，主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠(chéng)為信、合同守信”的經(jīng)營(yíng)理念。堅(jiān)持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
Y190酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
Y190酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞