ATCCElectrocompetent Cell

農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品標(biāo)簽：

ATCC；MSU440；Ar 1193；Ar A4；K599；C58C1；Agrobacterium rhizogenes 發(fā)根農(nóng)桿菌；pCAMBIA2301；Streptomycin 鏈mei素；Rifampicin利fu平；

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產(chǎn)品描述

發(fā)根農(nóng)桿菌（Agrobacterium rhizogenes）是根瘤菌科農(nóng)桿屬的一種革蘭氏陰性土壤細(xì)菌，能夠侵染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個(gè)別裸子植物。起關(guān)鍵作用的是其攜帶的Ri質(zhì)粒，含有負(fù)責(zé)發(fā)根自主性生長和冠癭堿合成的基因。結(jié)構(gòu)上與Ti質(zhì)粒類似，主要有致毒區(qū)（Vir），T-DNA區(qū)以及冠癭堿合成功能區(qū)等。

根據(jù)合成冠癭堿的不同，Ri質(zhì)粒分為4種類型：1）甘露堿型；2）黃瓜堿型；3）農(nóng)桿堿型；4）米奇矛型。

發(fā)根農(nóng)桿菌菌株ATCC來源于American type culture collection (ATCC)，為發(fā)根農(nóng)桿菌原始菌株。ATCC含pRi農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒，具有廣泛的宿主范圍（禾本科，豆科，煙草等），特別適合對zi杉醇，青蒿等藥用植物毛狀根的誘導(dǎo)。

我司提供的ATCC電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，特別適合大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化?；蛐蜑?/span>Agrobacterium rhizogenes pRi (agropine type)，經(jīng)pCAMBIA2301質(zhì)粒（卡那mei素抗性）檢測轉(zhuǎn)化效率>10⁵ cfu/μg DNA。

產(chǎn)品包裝

注意事項(xiàng)

• 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-80℃，不可反復(fù)凍融和放置時(shí)間過長，以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

• 整個(gè)轉(zhuǎn)化操作，嚴(yán)格根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件要求進(jìn)行。

3） 加入質(zhì)粒的體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10。質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染，會導(dǎo)致轉(zhuǎn)化效率急劇下降。質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個(gè)數(shù)量級。

• 為確保高轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過程應(yīng)盡量輕柔，并保持低溫。

5） 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞中不可混入氣泡，轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少終涂板用量。

6） 平板上克隆密度過大時(shí)，由于營養(yǎng)不足，克隆生長變慢，菌落變小。為獲得大菌落，應(yīng)減少質(zhì)粒用量。

7） ATCC生長緩慢，轉(zhuǎn)化質(zhì)粒后的ATCC涂布在含抗生素的平板上應(yīng)生長72h。

8） 為了保證加的轉(zhuǎn)化效率，發(fā)根農(nóng)桿菌的培養(yǎng)建議使用TY培養(yǎng)基（配方見附表1）。

9） 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法

• 將0.1 cm電基杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈吸水紙上5min，待其瀝干水分，正置5min，使乙醇充分揮發(fā)干凈，立即插入冰中，壓實(shí)冰面，電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5min使其充分降溫。

• 
  

• 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞插入冰中5min，待其*融化。

• 往50μl感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入0.01~1μg（體積不大于6μl）質(zhì)粒DNA，用手拍打管底使其混勻，立即插入冰中。用槍輕輕吹打混勻感受態(tài)細(xì)胞-質(zhì)粒之后快速轉(zhuǎn)移到電基杯中，蓋上杯蓋，空管保留待用【注意：質(zhì)粒DNAhao用試劑盒抽提，且用雙蒸水溶解。由于感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率較高，*次使用hao做預(yù)試驗(yàn)確定加的質(zhì)粒用量】。

• 啟動電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此參數(shù)參考Bio-rad，具體使用請參考電轉(zhuǎn)儀推薦步驟來操作），將電基杯從冰中取出，吸水紙吸干外表面水分，快速放入電轉(zhuǎn)槽中，啟動電基，電基完成快速插入冰中。

• 加入1ml無抗生素的TY并轉(zhuǎn)移到感受態(tài)空管中，于28℃振蕩培養(yǎng)2~3h。

6) 6,000rpm離心1min，留取 100ul左右上清，之后用槍輕輕吹打重懸菌體。之后加到含相應(yīng)抗生素的TY平板上，用無菌玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開。室溫正置10 min，待液體被吸收后，倒置平板，28℃培養(yǎng)72h。

相關(guān)產(chǎn)品

附表1 固體和液體TY培養(yǎng)基配方

附表2 固體和液體YMB培養(yǎng)基配方

附表3常見發(fā)根農(nóng)桿菌對抗生素敏感性總表

附表4 ATCC菌株質(zhì)粒轉(zhuǎn)化篩選抗生素使用濃度

— —Written/Edited by V. Shallan

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ATCC農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 表達(dá)分析

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