FerroFarRed 亞鐵離子熒光探針
簡要描述：
FerroFarRed 亞鐵離子熒光探針，也稱為SiRhoNox-1、ER-SiRhoNox，是一種特異性檢測不穩(wěn)定的鐵(II)離子（Fe2+）的熒光探針。FerroFarRed基本無熒光，一旦與Fe2+反應(yīng)后，不可逆的生成一種遠(yuǎn)紅熒光產(chǎn)物（Absmax=646nm，F(xiàn)Lmax=662nm，圖1. FerroFarRed的光譜特征）。
產(chǎn)品時間：2024-10-10
打印當(dāng)前頁FerroFarRed (Fe2+indicator) 亞鐵離子熒光探針
產(chǎn)品標(biāo)簽
FerroFarRed；FeRhoNox-1；FerroOrange；Labile ferrous ion 不穩(wěn)定鐵(II)離子；Fe2+熒光探針Ferroptosis 鐵死亡；C11 BODIPY 581/591 脂質(zhì)過氧化探針；
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
FerroFarRed (Fe2+ indicator) 亞鐵離子熒光探針 | MX4580-50nmol | 50nmol | 2480 |
FerroFarRed (Fe2+ indicator) 亞鐵離子熒光探針 | MX4580-100nmol | 100nmol | 4580 |
| FerroFarRed (Fe2+ indicator) 亞鐵離子熒光探針 | MX4580-50nmol-S | 50nmol-S |
產(chǎn)品描述
FerroFarRed，也稱為SiRhoNox-1、ER-SiRhoNox，是一種特異性檢測不穩(wěn)定的鐵(II)離子（Fe2+）的熒光探針。FerroFarRed基本無熒光，一旦與Fe2+反應(yīng)后，不可逆的生成一種遠(yuǎn)紅熒光產(chǎn)物（Absmax=646nm，F(xiàn)Lmax=662nm，圖1. FerroFarRed的光譜特征）。生理濃度下的鐵（III）離子（Fe3+）或其它除鐵離子以外的二價金屬離子都不會使其熒光增強(qiáng)（見圖2. FerroFarRed的金屬離子反應(yīng)特異性）。FerroFarRed具細(xì)胞膜滲透性和高選擇性，且在高達(dá)100μM的濃度下對細(xì)胞幾乎無毒性，適用于活細(xì)胞內(nèi)Fe2+的檢測，傾向定位在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER）。適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡、熒光酶標(biāo)儀以及流式細(xì)胞儀（配置紅色激光器）分析。
圖1.FerroFarRed的光譜特征。FerroFarRed在0.05M HEPES buffer，pH 7.4下的吸收光譜（左）和熒光光譜（右）。FerroFarRed的吸收波長在646nm，而熒光波長在662nm。
圖2.FerroFarRed的金屬離子反應(yīng)特異性。FerroFarRed（5 μM）與各種金屬離子反應(yīng)后，用熒光酶標(biāo)儀測定熒光強(qiáng)度（激發(fā)波長：630nm，發(fā)射波長665nm）。可見，僅與Fe2+反應(yīng)后發(fā)生顯著的熒光增強(qiáng)。
保存與運(yùn)輸方法
保存：≤-20℃避光干燥保存，至少1年有效。
運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。
注意事項(xiàng)
1） FerroFarRed傾向定位在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，但也可能檢測細(xì)胞質(zhì)池內(nèi)的Fe2+，目前針對這一點(diǎn)未做明確評估。
2） 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
3） 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說明
一、 需要自行準(zhǔn)備的材料
1.1 細(xì)胞培養(yǎng)級或超純DMSO（比如：MS4601A-100ML）【強(qiáng)烈建議將高純的DMSO分裝成單次用量保存在極低溫冷凍室內(nèi)，比如-80℃，避免吸潮。降解的DMSO可能會增加FerroFarRed的背景信號】
1.2 合適的觀察緩沖液（比如：PBS, pH 7.4；HBSS；等）。不要含酚紅。
1.3 無血清細(xì)胞培養(yǎng)基（D-MEM等）
二、探針準(zhǔn)備
2.1從冰箱取出FerroFarRed，置于室溫回溫至少30min，將其置于微量離心機(jī)內(nèi)低速離心。將瓶內(nèi)的粉末離心到管底后，再開蓋。
2.2 往一管FerroFarRed（50nmol）內(nèi)加入50μl 高質(zhì)量DMSO，用槍反復(fù)吹吸5次或以上，使其完quan溶解即得到1mM FerroFarRed儲存液?！咀⒁猓篎erroFarRed是藍(lán)色固體，但溶液幾乎無色（淺藍(lán)色）】。建議單次用完儲存液，若實(shí)在用不完，請根據(jù)單次用量分裝，置于-80℃避光保存。用中性緩沖液來稀釋儲存液。
三、HeLa細(xì)胞Fe2+的染色步驟（熒光成像分析）
3.1 在玻底培養(yǎng)皿內(nèi)接種細(xì)胞，培養(yǎng)過夜。
3.2從培養(yǎng)皿內(nèi)吸走培養(yǎng)基，用合適的觀察緩沖液（比如：HBSS）清洗兩次。
3.3 用無血清細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋1uM FerroFarRed儲存液，制備成5mM的染色工作液。
3.4 將染色工作液加入培養(yǎng)皿內(nèi)，于37℃孵育1h。
【注意：①建議根據(jù)細(xì)胞類型和自身實(shí)際需求優(yōu)化工作濃度和孵育時間。②如果細(xì)胞很容易從培養(yǎng)皿上脫落，建議使用多聚L-賴氨酸或其它包被基質(zhì)包被的培養(yǎng)皿來接種細(xì)胞?！?/p>
3.5 染色后用觀察緩沖液（比如：HBSS）清洗一次，替換成新的觀察緩沖液。
3.6 在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞。
四、HepG2細(xì)胞Fe2+的測定（流式分析）
4.1 于多孔培養(yǎng)板內(nèi)接種細(xì)胞，過夜培養(yǎng)。
4.2 從培養(yǎng)板內(nèi)吸走培養(yǎng)基，用合適的觀察緩沖液（比如：HBSS）輕輕的清洗兩次。
4.3 用無血清細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋1uM FerroFarRed儲存液，制備成5mM的染色工作液。
4.4 將染色工作液加入培養(yǎng)板內(nèi)，于37℃孵育1h。
【注意：建議根據(jù)細(xì)胞類型和自身實(shí)際需求優(yōu)化工作濃度和孵育時間?！?/p>
4.5 染色后，用PBS清洗一次，之后加入0.25% yi酶-EDTA消化細(xì)胞。
4.6 于冰上用PBS稀釋0.25% yi酶-EDTA，之后500 x g離心細(xì)胞懸液5min，以沉淀細(xì)胞。
【注意：不可用血清來中和yi酶?！?/p>
4.7 吸走上清，用PBS重懸細(xì)胞。
4.8 用細(xì)胞篩網(wǎng)（40μm尼龍篩網(wǎng)）過濾細(xì)胞，去除細(xì)胞碎片。
4.9 上機(jī)，流式細(xì)胞儀分析。
對于激光激發(fā)：635nm波長左右的激光器比較適合。熒光在660nm左右觀察。
對于熒光顯微鏡觀察：選擇檢測Cy5的紅色激發(fā)濾片。對于流式分析，選擇檢測APC的濾片。
相關(guān)產(chǎn)品
名稱 | 規(guī)格 | |
MX5211-1MG | C11 BODIPY 581/591脂質(zhì)過氧化熒光探針 | 1mg |
MX4558-50UG | FeRhoNox-1 (Fe2+indicator)亞鐵離子熒光探針 | 50μg |
MX4559-24UG | FerroOrange (Fe2+indicator)亞鐵離子熒光探針 | 24μg |
MX4580-50nmol | FerroFarRed (Fe2+indicator)亞鐵離子熒光探針 | 50nmol |
MX5401-1MG | MitoPerOx Mitochondrial Lipid Peroxidation Indicator 線粒體脂質(zhì)過氧化探針 | 1mg |
MX5402-1MG | BODIPY 558/568 C12脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)熒光探針 | 1mg |
MS5598-100MG | Ammonium iron(Ⅱ) sulfate hexahydrate, 99.997% trace metals basis 硫suan亞鐵(II)銨，六水合物 | 100mg |
MS5599-1G | 2,2'-Bipyridyl 2,2'-聯(lián)吡啶 | 1g |
MS3501-500ML | Hanks' Balanced Salt Solution (w/o Ca2+&Mg2+, w/o phenol red ) Hanks平衡yan溶液（無鈣鎂，無酚紅） | 500ml |
MS3505-500ML | 1× Hanks' Balanced Salt Solution (w/Ca2+&Mg2+, w/o phenol red ) 1×Hanks平衡yan溶液（含鈣鎂，無酚紅） | 500ml |
FerroFarRed的染色示例（來自文獻(xiàn)）
Ref 1. Li Z, Jiang L, Chew SH, et al. Carbonic anhydrase 9 confers resistance to ferroptosis/apoptosis in malignant
mesothelioma under hypoxia. Redox Biology. 2019 Sep;26:101297. DOI: 10.1016/j.redox.2019.101297. PMID:
31442913; PMCID: PMC6831888.
檢測方法（Fe(II)的細(xì)胞定位）：Catalytic Fe(II) was detected with a fluorescent turn-on probe, SiRhoNox-1 (FerroFarRed;), as previously described. Cells (5?×?104) were cultured in normoxia on 35-mm glass bottom dish for 16?h?at 37?°C. After treatment with CA9 inhibitors under hypoxia for 48?h, cells were co-stained with 5?μM of SiRhoNox-1 and 200?nM of LysoTracker Green in FluoroBrite DMEM for 30?min?at 37?°C in normoxia, followed by incubation with 75?nM of MitoTracker Red for another 30?min. We confirmed that 1-h incubation in FluoroBrite DMEM containing 0.1?mg/L (0.25?μM) Fe(NO3)3 scarcely affects iron metabolism of the cells within this limited period. Medium was replaced with new FluoroBrite DMEM, followed by observation with a confocal microscope (LSM880, Carl Zeiss; Oberkochen, Germany). The excitation/emission used for SiRhoNox-1, LysoTracker and MitoTracker probes were 633/670, 504/511 and 579/599?nm, respectively. Local signal intensity of the regions overlapped with each organelle-trackers were analyzed with ZEN Imaging Software (Carl Zeiss).
Fig. 1 CA9 overexpression in MM cells correlates with increased catalytic Fe(II) in response to hypoxia. (F) Differential levels of catalytic Fe(II) in normoxia or hypoxia of ACC-Meso-1?cells were determined by staining with SiRhoNox-1 (5?μM), followed by evaluation with a flow cytometer after 48 h-incubation. (G) Localization of catalytic Fe(II) in normoxic or hypoxic ACC-Meso-1?cells were analyzed by co-staining of SiRhoNox-1 (5?μM), LysoTracker (200?μM) and MitoTracker (75?μM) after 48 h-incubation and observation with a confocal microscope. Integrated intensity per cell (N?=7) was quantified by ZEN Imaging Software (ZEISS) (means ± SEM; *P < 0.05, **P < 0.01, ***P<?0.001 vs each control unless indicated by bar). Refer to text for details. SM, sarcomatoid mesothelioma; EM, epithelioid mesothelioma; N, normoxia; H, hypoxia; A.U., arbitrary unit.
— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品與實(shí)驗(yàn)服務(wù)工作，主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經(jīng)營理念。堅(jiān)持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。