BL21 Star (DE3) pLysS Chemically Competent Cell 

大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品標(biāo)簽：

BL21 Star (DE3) pLysS；Rosetta (DE3)；BL21 (DE3)；表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞；pET表達(dá)載體；IPTG誘導(dǎo)；非毒性蛋白表達(dá)；

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【好消息】：見(jiàn)我司整理的BL21系列表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞常見(jiàn)問(wèn)題。

產(chǎn)品組分：

菌株描述

BL21 Star (DE3) pLysS菌株來(lái)源于BL21(DE3)菌株。DE3命名表明該菌株染色體上整合λ噬菌體DE3溶原體（其上攜帶lacUV5啟動(dòng)子調(diào)控的T7 RNA聚合酶基因），IPTG用來(lái)誘導(dǎo)T7 RNA聚合酶的表達(dá)。該菌株含突變的rne基因（rne131），編碼合成截短的RNase E，此酶喪失mRNA水解能力從而提高mRNA轉(zhuǎn)錄體的穩(wěn)定性并增加異源蛋白產(chǎn)量。作為大腸桿菌B/r菌株，不含有l(wèi)on蛋白酶和缺乏外膜蛋白酶OmpT，降低了外源蛋白的降解。

BL21 Star (DE3) pLysS菌株攜帶pLys質(zhì)粒，具有氯mei素抗性（CamR）。含有表達(dá)T7溶jun酶的基因，T7溶jun酶能夠作用于大腸桿菌細(xì)胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌，從而能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平，但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達(dá)。pLys質(zhì)粒還含有p15A復(fù)制起始子，這一起始子使其兼容于pUC或pBR322來(lái)源的質(zhì)粒。

BL21 Star (DE3) pLysS菌株特別設(shè)計(jì)適用于高拷貝、T7啟動(dòng)子表達(dá)載體（比如pRSET T7載體）的非毒性蛋白的高水平表達(dá)。與BL21菌株相比，BL21 Star菌株由于提高的mRNA穩(wěn)定性，呈現(xiàn)出更高的異源基因基礎(chǔ)表達(dá)，因此不適合毒性蛋白表達(dá)。然而，BL21 Star (DE3) pLysS菌株比BL21 Star菌株表達(dá)更低。

BL21 Star (DE3) pLysS菌株基因型：F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm rne131(DE3) pLysS (CamR)

產(chǎn)品描述

本品是大腸桿菌BL21 Star (DE3) pLysS菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)107 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

保存與運(yùn)輸條件

保存：-80℃保存，六個(gè)月有效。

運(yùn)輸：干冰運(yùn)輸。

注意事項(xiàng)

1）   感受態(tài)細(xì)胞必須用干冰運(yùn)輸。感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在-80℃保存，不可反復(fù)凍融且放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)減低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

2）   最好在冰上融化感受態(tài)細(xì)胞。

3）   進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí)，需在相應(yīng)溫度及無(wú)菌條件下進(jìn)行。

4）   為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可保留部分連接反應(yīng)液以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到zui低。

5）   產(chǎn)品包裝內(nèi)含質(zhì)粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供對(duì)照實(shí)驗(yàn)用。

6）   BL21 Star (DE3) pLysS菌株攜帶pLysS質(zhì)粒，除復(fù)蘇培養(yǎng)基不含抗生素之外，其他所用培養(yǎng)基、培養(yǎng)液都應(yīng)含有氯mei素（34μg/ml），以防止質(zhì)粒丟失。

7）   為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無(wú)菌條件的標(biāo)準(zhǔn)下進(jìn)行】

1）  從-80℃冰箱取出取感受態(tài)細(xì)胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA，用手輕彈管底輕輕混勻，冰浴靜置25min。

2）   42℃熱激45s，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3min。此過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。

3）   向每個(gè)離心管中加700 μl無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養(yǎng)60min，目的使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。

4）   低速離心收菌（比如4000rpm，2min），留取100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到含氯mei素（34μg/ml）以及所選質(zhì)粒篩選抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無(wú)菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開(kāi)，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16h。

【注意】：

a）涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可不用離心，直接取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，則通過(guò)離心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。

b）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

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