大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細胞表達分析
簡要描述：
大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細胞表達分析BL21-AI菌株來源于BL21菌株，是一種大腸桿菌B/r菌株（E. Coli B/r）。含有一個染色體整合的編碼T7 RNA聚合酶（T7 RNAP）的基因到araBAD操縱子的araB位點，通過操控araBAD啟動子來調(diào)節(jié)T7 RNA聚合酶的表達。
產(chǎn)品時間：2024-12-16
打印當(dāng)前頁BL21-AI Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細胞
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產(chǎn)品標(biāo)簽：
BL21 Star (DE3) pLysS；Rosetta (DE3)；BL21 (DE3)；表達感受態(tài)細胞；pET表達載體；IPTG誘導(dǎo)；非毒性蛋白表達；
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貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價格（元） |
MF2336-1000UL | BL21-AI Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細胞 | 10×100μl | 450 |
MF2336-5000UL | BL21-AI Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細胞 | 50×100μl | 1880 |
【好消息】：見我司整理的BL21系列表達感受態(tài)細胞常見問題。
產(chǎn)品組分：
組分編號 | 組分名稱 | 貨號（規(guī)格） | |
MF2336-1000UL | MF2336-5000UL | ||
MF2336-A | BL21-AI Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
MF2336-B | Control Plasmid puC19, 10pg/μl | 10μl | 10μl |
菌株描述
BL21-AI菌株來源于BL21菌株，是一種大腸桿菌B/r菌株（E. Coli B/r）。含有一個染色體整合的編碼T7 RNA聚合酶（T7 RNAP）的基因到araBAD操縱子的araB位點，通過操控araBAD啟動子來調(diào)節(jié)T7 RNA聚合酶的表達。此菌株已經(jīng)敲除araB基因。tetA基因賦予四環(huán)素抗性，允許用四環(huán)素來驗證菌株。
由于T7 RNAP基因位于araBAD操縱子的araB位點，因此，可通過糖類（L-阿拉伯糖和葡萄糖）來調(diào)節(jié)T7 RNA聚合酶的表達。在培養(yǎng)基內(nèi)加入L-阿拉伯糖，能夠誘導(dǎo)araBAD啟動子下游T7 RNA聚合酶表達，進而促進目的蛋白表達；而在培養(yǎng)基加入葡萄糖，能夠抑制araBAD啟動子下游T7 RNA聚合酶表達，進而抑制目的蛋白表達。BL21-AI菌株適用于任何以T7啟動子為基礎(chǔ)的表達載體，進行高水平的重組蛋白表達。由于T7 RNA聚合酶的表達水平能被高度調(diào)控，該菌株特別適用于表達對其他BL21菌株有毒或抑制生長的蛋白。
BL21-AI菌株缺乏lon蛋白酶和外膜蛋白酶OmpT的基因，這兩種酶的缺失能夠降低外源重組蛋白在菌體內(nèi)的降解，從而增加了蛋白表達量。最終，BL21-AI菌株表達所得的重組蛋白產(chǎn)量與其他BL21菌株相近。
BL21-AI菌株基因型：F-ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm araB::T7RNAP-tetA
需求條件
建議在以下幾個情況下選擇BL21-AI菌株來表達您的目的基因：
a） 正在使用T7啟動子為基礎(chǔ)的表達載體（高拷貝或低拷貝皆可）
b） 當(dāng)使用其他BL21菌株發(fā)現(xiàn)生長抑制現(xiàn)象（比如毒性）
c） 正要表達一種已知的毒性蛋白
產(chǎn)品描述
本品是大腸桿菌BL21-AI菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細胞，可用于DNA的熱激轉(zhuǎn)化。特別適合任何以T7啟動子為基礎(chǔ)的表達載體系統(tǒng)，且要求嚴格調(diào)控和大量表達毒性蛋白的應(yīng)用。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達108 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。
保存與運輸條件：
保存：-80℃保存，六個月有效。
運輸：干冰運輸。
注意事項
1） 感受態(tài)細胞必須用干冰運輸。感受態(tài)細胞應(yīng)在-80℃保存，不可反復(fù)凍融且放置時間過長，否則會減低感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率。
2） 最好在冰上融化感受態(tài)細胞。
3） 進行轉(zhuǎn)化操作時，需在相應(yīng)溫度及無菌條件下進行。
4） 為防止轉(zhuǎn)化實驗不成功，可保留部分連接反應(yīng)液以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到zui低。
5） 產(chǎn)品包裝內(nèi)含質(zhì)粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供對照實驗用。
6） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)下進行】
1） 從-80℃冰箱取出取感受態(tài)細胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA，用手輕彈管底輕輕混勻，冰浴靜置25min。
2） 42℃熱激45s，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3min。此過程不要搖動離心管。
3） 向每個離心管中加700 μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養(yǎng)60min，目的使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達，使菌體復(fù)蘇。
4） 低速離心收菌（比如4000rpm，2min），留取100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到含相應(yīng)抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16h。
【注意】：
a）涂布用量可根據(jù)具體實驗調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可不用離心，直接取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，則通過離心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。
b）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。
c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。
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名稱 | 規(guī)格 | |
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MF2339-1000UL | Rosetta-gami 2(DE3) Chemically Competent Cell大腸桿菌感受態(tài)細胞 | 10×100μl |
MF2340-1000UL | Rosetta-gami B(DE3) Chemically Competent Cell大腸桿菌感受態(tài)細胞 | 10×100μl |
MF2334-1000UL | BL21 Star (DE3) Competent Cell大腸桿菌感受態(tài)細胞 | 10×100μl |
MF2335-1000UL | BL21 Star (DE3) pLysS Competent Cell大腸桿菌感受態(tài)細胞 | 10×100μl |
MS0023-25G | Streptomycin Sulfate, USP Grade硫酸鏈mei素 | 25g |
MS0021-10G | Chloramphenicol, USP Grade氯mei素 | 10g |
MS0018-10G | Ampicillin, Sodium Salt氨芐青mei素鈉 | 10g |
MS0017-5G | Carbenicillin, Disodium Salt羧芐青mei素二鈉鹽 | 5g |
MS0019-10G | Kanamycin Sulfate硫酸卡那mei素 | 10g |
MS0014-1G | Rifampicin, USP Grade利fu平 | 1g |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務(wù)工作，主要從事細胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經(jīng)營理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
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